- 刘新兰;厚玉瑾;吕燕;郭婷;
目的探讨甲磺酸阿帕替尼抑制乳腺癌细胞增殖的生物学行为及调控Erk1/2信号通路的分子机制。方法体外培养乳腺癌MDA-MB-231细胞,CCK-8法检测细胞增殖。流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布;激光共聚焦显微镜观察细胞自噬体形成情况。Western blotting法检测凋亡、自噬及Erk1/2信号通路相关蛋白表达。结果阿帕替尼作用乳腺癌细胞24、48和72 h的IC_(50)分别为(50.13±0.24)μmol/L、(38.42±0.24)μmol/L和(25.13±0.24)μmol/L。MDA-MB-231细胞凋亡率随阿帕替尼浓度的增加而逐渐升高(P<0.001),凋亡相关蛋白cleaved-PARP1、caspase-3、cleaved-caspase-3表达量逐渐降低(P<0.001);且阿帕替尼组细胞主要阻滞在G0/G1期(P<0.001)。阿帕替尼组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达和P62蛋白表达较空白对照组升高,同时Beclin1蛋白表达较空白对照组降低(P<0.05)。而加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)后,MDA-MB-231细胞凋亡率增加,cleaved-caspase-3蛋白表达升高(P<0.05)。生物信息学分析揭示了阿帕替尼作用靶点VEGFR-2和MAPK信号通路之间的分子相互作用。Western blotting结果显示,阿帕替尼组p-Erk1/2蛋白相对表达量降低(P<0.05);而3MA+阿帕替尼组p-Erk1/2蛋白表达量较阿帕替尼组进一步下降(P<0.05)。此外与阿帕替尼组比较,PD98059+阿帕替尼组p-Erk1/2表达量升高(P<0.05),而Erk1/2、cleaved-caspase3、PARP1蛋白表达量和自噬蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ相对表达量降低(P<0.05)。结论阿帕替尼通过抑制Erk1/2信号通路诱导MDA-MB-231细胞凋亡,促进细胞自噬。
2021年06期 v.26;No.234 481-487页 [查看摘要][在线阅读][下载 2576K] - 黄静山;张洪岩;鲁继斌;
目的探讨紫草素(SHI)通过调节受体相互作用蛋白1(RIP1)/受体相互作用蛋白3(RIP3)/混合系激酶区域样蛋白(MLKL)轴诱导非小细胞肺癌A549细胞程序性坏死的作用机制。方法体外培养A549细胞,MTT法检测SHI对细胞增殖活性的影响; Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡和死亡; Western blotting法检测细胞RIP1、RIP3、MLKL蛋白表达。DCFH-DA探针检测A549细胞中活性氧(ROS)生成水平。结果 SHI作用24h后,A549细胞的半数抑制浓度(IC_(50))为(19.62±1.53)μmol/L。与空白组比较,SHI组细胞凋亡率、死亡率均显著增加(P<0.05);此外caspase-3和caspase-8荧光活性增加也显著增加(P<0.05)。Western blotting结果显示,SHI组A549细胞RIP1蛋白、RIP3蛋白、p-MLKL/MLKL比值均升高;而经Nec-1预先干预后,RIP1蛋白、RIP3蛋白、p-MLKL/MLKL比值则降低(P<0.05)。另外,与空白组比较,SHI组DCFH-DA相对荧光强度升高(4.53±0.44)倍,而经SHI+NAC组相对荧光强度降低为空白组的(2.17±0.25)倍(P<0.05)。结论紫草素可通过RIP1/RIP3/MLKL通路诱导A549细胞发生程序性坏死,进而抑制细胞增殖活力,具有明显的抗肿瘤效应。
2021年06期 v.26;No.234 488-492页 [查看摘要][在线阅读][下载 1579K] - 高雪峰;余旭辉;张锐;余力;
目的探讨长链非编码RNA同源异型基因簇A远端转录本(lnc RNA HOTTIP)对肺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及可能机制。方法体外培养A549细胞,构建HOTTIP敲降载体、mi R-615 inhibitor转染A549细胞,分为空白对照组、阴性对照组、HOTTIP sh RNA组、HOTTIP sh RNA+无序序列组、HOTTIP sh RNA+mi R-615 inhibit表达ors组。采用MTT、Transwell、免疫荧光法检测下调HOTTIP表达对A549细胞增殖、侵袭和迁移的影响。采用双荧光素酶报告实验检测lnc RNA HOTTIP、mi R-615及IGF2的靶向调控关系。采用实时荧光定量PCR(q PCR)和Western blotting检测HOTTIP、mi R-615和IGF的表达量。结果 A549细胞中HOTTIP相对表达量为1.74±0.08,高于BEAS-2B细胞的1.00±0.05(P<0.001)。HOTTIP sh RNA组,HOTTIP相对表达量为0.43±0.04,低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)。下调HOTTIP表达后,A549细胞增殖、侵袭和迁移活性低于空白对照组(P<0.05),细胞凋亡率相应增加(P<0.05)。双荧光素酶报告实验证实HOTTIP靶向作用mi R-615,而mi R-615可负调控IGF2的表达。HOTTIP sh RNA组细胞mi R-615表达量高于空白对照组,IGF2 m RNA表达量低于阴性对照组,而HOTTIP sh RNA+mi R-615 inhibitors组IGF2 m RNA和蛋白表达量较HOTTIP sh RNA组升高(P<0.05)。结论敲除A549细胞中lnc RNA HOTTIP表达后可通过上调mi R-615并下调IGF2进而抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭活性。
2021年06期 v.26;No.234 493-498页 [查看摘要][在线阅读][下载 2176K] - 王小萍;刘海霞;郑晓霞;
目的探究生长阻滞和DNA损伤诱导45A(GADD45A)对宫颈癌细胞顺铂(DDP)获得性耐药的影响及可能的分子机制。方法体外培养He La细胞,通过DDP诱导建立He La耐药细胞He La/DDP,实时荧光定量PCR(q PCR)检测GADD45A表达。将He La/DDP细胞分为空白对照组(细胞不做任何处理)、阴性对照组(转染阴性对照病毒空载体)、GADD45A转染组(转染GADD45A过表达慢病毒载体)、GADD45A+Anisomycin组(细胞转染GADD45A过表达慢病毒载体后加入JNK/p38激活剂Anisomycin)。CCK-8法和细胞集落形成法检测He La/DDP细胞耐药性。彗星实验和流式细胞术检测DDP对各组He La/DDP细胞DNA损伤、细胞周期和凋亡的影响。Western blotting法检测各组细胞p38蛋白表达。结果He La细胞中美好中GADD45A m RNA表达量低于正常宫颈鳞状上皮细胞H8(0.70±0.09 vs. 1.00±0.04,P<0.05)。He La/DDP细胞中GADD45A m RNA表达量低于He La细胞(0.48±0.05 vs. 0.70±0.09,P<0.05)。GADD45A转染组He La/DDP细胞对DDP的耐药指数低于空白对照组(23.57±1.26 vs.76.55±5.79),且细胞集落数量减少(119±26 vs.415±33),同时DNA损伤率增加[尾长(75.26±19.83)μm vs.(21.47±6.41)μm],S期细胞比例升高[(34.22±1.49)%vs.(15.40±2.98)%],细胞凋亡率增加[(40.98±4.59)%vs.(5.56±0.77)%],差异具有统计学意义P<0.05)。与空白对照组比较,GADD45A转染组He La/DDP细胞GADD45A蛋白表达增强,但p-p38/p38蛋白比值降低(P<0.05)。GADD45A+Anisomycin组上述指标较GADD45A组被逆转。结论在DDP耐药宫颈癌细胞中GADD45A表达普遍下调,上调GADD45A表达可以降低He La/DDP细胞活性,增加DDP诱导细胞凋亡和DNA损伤,且与抑制p38磷酸化激活有关。
2021年06期 v.26;No.234 499-505页 [查看摘要][在线阅读][下载 2167K] - 张美蓉;张競;张永刚;宋晓霞;张晶晶;
目的探讨雷公藤甲素抑制结肠癌增殖增殖、诱导凋亡的机制。方法稳定培养结肠癌HT29细胞,分别加入含25、50、100、200、400、600 mg/L雷公藤甲素的培养基进行干预,采用CCK-8法、流式细胞术、细胞集落形成实验检测雷公藤甲素对HT29细胞增殖和凋亡的影响。构建裸鼠结肠癌移植瘤模型,将30只裸鼠随机分为对照组、雷公藤甲素100 mg/kg组和400 mg/kg组。对照组给予0.2 ml生理盐水灌胃,雷公藤甲素组灌胃剂量分别为100 mg/kg和400 mg/kg,1次/d,共14 d。比较各组裸鼠抑瘤率、检测移植瘤组织中细胞凋亡情况。结果雷公藤甲素体外能抑制HT29细胞的增殖,且抑制作用呈浓度和时间依赖性。HT29细胞对照组、100 mg/L组、200 mg/L组、400 mg/L组的细胞凋亡率分别为(7.85±1.44)%、(13.86±2.08)%、(20.45±2.83)%、(28.52±2.41)%,差异均有统计学意义(P<0.05)。随着雷公藤甲素干预浓度升高,HT29细胞中Bcl-2蛋白表达量逐渐降低,而caspase-3和Bax蛋白表达量逐渐升高(P<0.05)。与对照组裸鼠比较,雷公藤甲素不同浓度给药组小鼠的肿瘤生长均受到明显抑制。100 mg/kg组抑瘤率为31.18%,400 mg/kg组为48.77%。雷公藤甲素干预后Ki67蛋白表达强度明显低于对照组(P<0.05)。Western blotting结果显示,雷公藤甲素作用48 h后,不同剂量组HT29细胞中p-PI3K蛋白和p-Akt蛋白的表达水平逐渐降低(P<0.05)。结论雷公藤甲素在体内外均能抑制人结肠癌HT29细胞的增殖同时诱导其凋亡,并通过抑制PI3K/Akt信号通路活性抑制结肠癌裸鼠的肿瘤生长。
2021年06期 v.26;No.234 506-511页 [查看摘要][在线阅读][下载 2380K] - 牛江涛;杨波;
目的探讨桑根皮素调控Wnt/β-catenin信号通路对脑胶质瘤U251细胞增殖的影响。方法体外培养人脑胶质瘤细胞U87,采用不同浓度桑根皮素(1、5、25、50、100μmol/L)作用于U87细胞,分别采用MTT法、细胞集落形成法、流式细胞术检测细胞增殖和凋亡活性。采用Western blotting法和细胞免疫荧光法检测Wnt-5a、β-catenin、糖原合酶激酶3β(GSK3β)、BIRC5(survivin)、Bcl-2相关X蛋白(BAX)表达情况以及β-catenin的核转位情况。结果基于网络药理学分析,Wnt/β-catenin信号通路是桑根皮素治疗脑胶质瘤的关键通路。桑根皮素呈剂量依赖方式和时间依赖方式抑制U87细胞的增殖。1、5、25、50、100μmol/L桑根皮素处理后,U87细胞集落形成数[(421±33)个、(380±41)个、(305±34)个、(207±56)个、(147±49)个]较空白对照组[(450±33)个]减少(P<0.001);细胞凋亡率[(12.76±1.18)%、(18.45±1.31)%、(25.02±1.69)%、(27.41±2.31)%、(38.16±2.19)%]较空白对照组[(2.18±0.19)%]增加(P<0.001)。桑根皮素可降低U87细胞中Wnt-5a、β-catenin、BIRC5、GSK3β蛋白表达量,同时上调BAX蛋白的表达;并且经细胞免疫荧光分析,桑根皮素可抑制β-catenin核转位。结论桑根皮素可能通过调节Wnt/β-catenin信号通路抑制U87细胞增殖,其作用机制可能为抑制β-catenin由胞浆向细胞核内转位,从而下调BIRC5表达并上调BAX表达。
2021年06期 v.26;No.234 512-517页 [查看摘要][在线阅读][下载 2012K] - 田风富;张雪峰;张文杰;时敬国;
目的探讨micro RNA-370(mi R-370)通过调控O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)增强替莫唑胺(TMZ)对胶质瘤化疗敏感性的机制研究。方法采用TMZ浓度梯度递增法体外建立U87/TMZR耐药细胞株,分别转染阴性空质粒和mi R-370 mimics作为mi R-NC组和mi R-370 mimics组,另将未经处理的U87/TMZR细胞作为对照组。采用实时荧光定量PCR(q PCR)和Western blotting检测mi R-370和MGMT表达。Target Scan在线预测和双荧光素酶报告实验分析mi R-370靶基因。采用MTT法和克隆形成实验检测各组细胞对替莫唑胺的敏感性。结果体外成功建立U87/TMZR耐药细胞株,U87/TMZR细胞mi R-370表达量较U87细胞降低(0.52±0.08 vs. 1.00±0.05,P<0.05); mi R-370 mimics组mi R-370表达量为5.65±0.77,高于对照组和mi R-NC组(P<0.05);而mi R-370 mimics组细胞MGMT蛋白表达量低于对照组(0.28±0.03 vs. 0.63±0.05,P<0.05)。经Target Scan在线预测和双荧光素酶报告实验结果显示,MGMT是mi R-370的靶基因。经不同浓度TMZ作用后,mi R-370 mimics组U87/TMZR细胞IC_(50)为(72.73±5.19)μmol/L,克隆形成数为179±35,均低于对照组和mi R-NC组(P<0.05)。结论 TMZ耐药肿瘤细胞中MGMT表达量增加,同时mi R-370表达量降低。上调mi R-370表达可通过抑制MGMT转录提高U87/TMZR耐药细胞对TMZ的敏感性。
2021年06期 v.26;No.234 518-522页 [查看摘要][在线阅读][下载 817K] - 张珂;张开炯;吴立春;王左;吴优;
目的探讨三阴性乳腺癌(TNBC)血清外泌体、组织中长链非编码RNA(lncRNA)小泛素样修饰子1伪基因3(SUMO1P3)表达对TNBC患者预后的影响。方法选取我院2015年1月至2016年3月期间91例TNBC患者、100例非TNBC乳腺癌患者、50例乳腺良性疾病患者、50例女性健康志愿者进行回顾性分析。比较4组受试者之间血清外泌体及组织lncRNA SUMO1P3、组织SUMO1蛋白表达的关系。通过受试者工作特征(ROC)曲线、Kaplan-Meier法评估血清外泌体lncRNA SUMO1P3对TNBC诊断及预后预测的价值。结果基于美国公共癌症基因数据库(TCGA)中的数据,乳腺癌组织中lncRNA SUMO1P3表达高于正常乳腺组织(P<0.05),lncRNA SUMO1P3低表达组患者的总生存期高于高表达组(P<0.05),乳腺癌组织中lncRNA SUMO1P3表达量与SUMO1基因表达量呈正相关性(r=0.66,P<0.05)。TNBC患者血清外泌体和组织中lncRNA SUMO1P3表达量最高。血清外泌体lncRNA SUMO1P3表达与T分期和肿瘤分级有关(P<0.05)。血清外泌体lncRNA SUMO1P3用于诊断TNBC的曲线下面积为0.756(95%CI:0.693～0.819)。血清外泌体lncRNA SUMO1P3高表达组患者的DFS明显低于低表达组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,血清外泌体lncRNA SUMO1P3表达是预测TNBC患者手术预后独立因素(P<0.05)。结论血清外泌体lncRNA SUMO1P3表达对TNBC患者预后预测有重要价值。
2021年06期 v.26;No.234 523-529页 [查看摘要][在线阅读][下载 1285K] - 李传翠;吴希锋;孙玲;李弹弹;
目的检测急性髓性白血病患者骨髓单个核细胞中肉碱棕榈酰转移酶1a(CPT1A)表达与诱导化疗疗效和预后的关系。方法从GEO数据库收集GSE9476、GSE30029、GSE1159数据集中的患者基因表达谱资料,进行生物信息学分析。另收集2016年3月至2019年7月在我院初诊并接受诱导化疗的正常核型急性髓性白血病(CN-AML) 86例。采用实时荧光定量PCR(q PCR)法检测骨髓单个核细胞中CPT1A表达。分析CPT1A表达与临床病理特征以及诱导化疗疗效的关系。Logistic回归分析影响疗效的因素,COX风险比例回归模型分析影响总生存时间(OS)的因素。结果 GSE9476数据集中CPT1A在AML患者骨髓样本(5.18±0.94 vs. 4.95±0.27,P<0.05)和外周血样本(5.23±1.33 vs. 4.52±0.22,P<0.05)中高表达。GSE30029数据集中AML患者CD34+细胞中CPT1A表达高于健康献血者(6.51±1.20 vs. 5.70±0.57,P<0.05)。q PCR结果显示,CN-AML患者骨髓单个核细胞中CPT1A相对表达量高于健康志愿者[1.25(1.03,1.73) vs. 0.95(0.86,1.14),P<0.05]。多因素Logistic回归分析显示,CPT1A基因高表达是影响CN-AML患者诱导化疗疗效的独立危险因素(P<0.05)。CPT1Ahigh组患者死亡率高于CPT1A~(low)组中位OS短于CPT1Alow组(18.0个月vs.未达),差异具有统计学意义(P<0.05)。多因素COX风险比例回归分析显示,CPT1A基因高表达是影响CN-AML患者OS的独立危险因素(P<0.05)。结论对于CNAML患者,骨髓单个核细胞中CPT1A m RNA普遍升高,高表达的CPT1A m RNA是影响CN-AML患者化疗反应性和生存预后的独立危险因素。
2021年06期 v.26;No.234 530-536页 [查看摘要][在线阅读][下载 1022K] - 黎亮;蔡仁中;李高;黄修明;
目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织的环状RNA circ_0080220水平和临床意义。方法选取2015年1月至2019年12月本院手术切除的115对NSCLC患者癌组织和配对癌旁组织,采用实时荧光定量PCR(q PCR)检测NSCLC组织的circ_0080220水平并分析circ_0080220水平与患者临床病理特征和预后间的关系。结果 NSCLC组织的circ_0080220水平为3.485±0.938,高于对应癌旁组织的1.043±0.460(t=25.068,P<0.001)。组织circ_0080220水平与NSCLC患者的年龄、性别、ECOG PS评分、病理类型和吸烟史均无关(P>0.05),而与TNM分期、肿瘤大小、淋巴结转移和分化程度有关(P<0.05)。NSCLC患者中circ_0080220高水平组的中位总生存期为44.0个月,短于低水平组的55.0个月(P=0.029),多因素分析显示,circ_0080220高水平是NSCLC预后不良的危险因素(HR=1.652,95%CI:1.123～2.247,P=0.035)。结论组织circ_0080220高水平与NSCLC患者的临床进展和预后较差密切相关,有作为NSCLC诊治和预后评估候选指标的潜能。
2021年06期 v.26;No.234 537-540页 [查看摘要][在线阅读][下载 401K] - 王锋;秦叔逵;华海清;刘秀峰;赵颖;施毅;王琴;成远;曹梦苒;程颖;李慧;陈歆妮;寻琛;郝利平;
目的观察免疫检查点抑制剂相关性肺炎(CIP)患者的临床特点。方法回顾性分析本中心CIP患者的详细资料,根据影像学特点、临床表现和治疗转归进行临床分型。结果自2016年9月1日至2020年8月31日,共564例患者在我院肿瘤内科接受PD-1/PD-L1抑制剂治疗,其中PD-1/PD-L1抑制剂单药134例,PD-1/PD-L1抑制剂联合化疗、分子靶向药物、VEGF抑制剂或CTLA-4抑制剂430例。共发生19例CIP,ICIs用药至发生CIP的中位时间为71天(2～444天),其中1级CIP 1例,2级CIP 4例,3-4级CIP 14例,CIP发生率为3.4%(19/564)。1例1级CIP患者自愈,其余18例患者均接受糖皮质激素治疗,8例治愈,7例好转,3例无效并死于CIP,死亡率15.8%(3/19)。根据患者的影像学资料、临床表现和治疗转归的特点,可将CIP分为磨玻璃型、斑片型和网格型3种类型,磨玻璃型对激素治疗敏感,预后较好;斑片型对激素治疗中度敏感,预后欠佳;网格型对激素治疗敏感性不佳,预后最差。结论 CIP是一类少见但有潜在致命危险的免疫相关不良反应(ir AEs),临床分型有助于CIP的早期诊断、预测疗效和判断预后。
2021年06期 v.26;No.234 541-549页 [查看摘要][在线阅读][下载 3248K] - 程颖;王轩;华海清;张冬华;张荣生;江涛;陆雷;
目的探讨索拉非尼治疗肝细胞癌肝移植术后肿瘤复发或转移晚期患者的疗效及不良反应。方法回顾性分析我院2008年1月至2020年10月收治的40例肝细胞癌肝移植术后发生复发或转移患者的临床资料,观察患者口服索拉非尼(400 mg,2次/日)治疗的近期疗效、远期生存及安全性。近期疗效采用RECIST1.1标准进行评估;生存分析采用Kaplan-Meier法并行Log-rank检验;不良反应按照NCI-CTC 3.0版标准进行评估。结果 40例患者均可进行疗效评价,完全缓解(CR) 0例,部分缓解(PR) 3例,疾病稳定(SD) 9例,客观有效率(ORR)为7.5%,疾病控制率(DCR)为30.0%。索拉非尼治疗的中位持续时间为7.1个月(范围:1～36个月)。至随访截止日期,40例患者中有25例死亡。全组患者的中位PFS为7.1个月(95%CI:4.086～10.114),中位OS为21.1个月(95%CI:10.584～31.616);相较于早期复发的肝移植患者,索拉非尼明显延长肝移植10个月后复发患者的中位OS(29.6个月vs. 14.7个月,P=0.032)。不良反应主要为CTCAE 1～2级,包括腹泻、手足皮肤反应、高血压、皮疹、肝功能异常、蛋白尿等。结论索拉非尼对肝细胞癌肝移植术后复发或转移的晚期患者有一定的疗效,特别是移植10个月以后复发的患者疗效更为显著,但这一结论仍需要前瞻性研究证实。
2021年06期 v.26;No.234 550-553页 [查看摘要][在线阅读][下载 223K]